Zhusheyong Ren Shengzhangjisu

Human Growth Hormone for Injection

分子式：C₉₉₀H₁₅₂₈N₂₆₂O₃₀₀S₇分子量：22  125Da

本品系由含有可高效表达人生长激素基因的工程化细胞，经过发酵、分离和高度纯化后获得的人生长激素冻干制成。加入适宜稳定剂和保护剂，不含抗生素和抑菌剂。每1mg无水人生长激素相当于3.0单位。

生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2.1  工程细胞

　　人生长激素工程化细胞名称、来源及种子批检定应符合批准的要求。

　　2.2  原液

　　2.2.1  种子液制备

　　将检定合格的工作种子批细胞接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养。

　　2.2.2  发酵用培养基

　　采用适宜的不含抗生素的培养基。

　　2.2.3  种子液接种及发酵培养

　　2.2.3.1  在灭菌培养基中接种适量种子液。

　　2.2.3.2  在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶解氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（通则3406）。

　　2.2.4  发酵液处理

　　用适宜的方法收集、处理菌体。

　　2.2.5  初步纯化

　　釆用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。

　　2.2.6  高度纯化

　　经初步纯化后，釆用经批准的纯化工艺进行高度纯化，过滤后使其达到3.1项要求，即为人生长激素原液。如需存放，应规定时间和温度。

　　2.2.7  原液检定

　　按3.1项进行。

　　2.3半成品

　　2.3.1  配制与除菌

　　按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。将原液用稀释液稀释至所需浓度，过滤后即为半成品，保存于适宜的温度。

　　2.3.2  半成品检定

　　按3.2项进行。

　　2.4  成品

　　2.4.1  分批

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　2.4.2  分装及冻干

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”与通则0102有关规定。

　　2.4.3  规格

　　0.85mg/瓶；1.2mg/瓶；1.6mg/瓶；3.7mg/瓶

　　2.4.4  包装

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理"与通则0102有关规定。

3.1  原液检定

　　3.1.1  外观

　　应为无色澄明或微浊液体。

　　3.1.2  鉴别

　　3.1.2.1  反相色谱法

　　取人生长激素原液适量，加0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液（用1mol/L盐酸溶液调节pH值至7.5）制成每1ml中含人生长激素2mg的溶液，作为供试品溶液；另取人生长激素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照3.1.3.1项色谱条件与系统适用性试验，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

　　3.1.2.2  肽图

　　色谱条件  依法检查（通则0512）。取人生长激素对照品，加0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液（用1mol/L盐酸溶液调节pH值至7.5）溶解并制成每1ml中含人生长激素2mg的溶液。取此液300μl、胰蛋白酶溶液［取经甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮（TPCK）处理的胰蛋白酶适量，加0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液溶解并制成每1ml含2mg的溶液］20μl与0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液300μl混匀，置37℃水浴4小时，立即置－20℃终止反应，作为对照品溶液；取人生长激素原液，按对照品溶液的方法制备，作为供试品溶液；另取不加胰蛋白酶溶液的供试品溶液作为空白溶液。用辛基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.1%三氟乙酸溶液为流动相A，以含0.1%三氟乙酸的90%乙腈溶液为流动相B；流速为每分钟1.0ml；柱温35℃；检测波长为214nm。按下表进行梯度洗脱。

　　测定法  取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。排除空白溶液色谱峰后，供试品溶液肽图应与对照品溶液一致。

　　3.1.2.3  高分子蛋白质保留时间

　　在3.1.4项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

　　3.1.2.4  等电聚焦

　　取人生长激素原液，用水稀释成每1ml含人生长激素1mg的溶液，取此溶液90μl，加两性电解质10μl和甲基红试液2μl，混匀得供试品溶液；另取人生长激素对照品，同法制备，作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各10μl加至上样孔，依法测定（通则0541第六法），供试品溶液主区带应与对照品溶液一致。

　　3.1.2.5  N末端氨基酸序列（至少每年测定1次）

　　采用氨基酸序列分析仪或其他适宜的方法测定。

　　N端序列应为：Phe-Pro-Thr-Ile-Pro-Leu-Ser-Arg-Leu-Phe-Asp-Asn-Ala-Met-Leu。

　　3.1.3  检查

　　3.1.3.1  相关蛋白质

　　色谱条件与系统适用性试验  依法测定（通则0512），用丁基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液（用1mol/L盐酸溶液调节pH值至7.5）-正丙醇（71∶29）为流动相，调节流动相中正丙醇比例使人生长激素主峰保留时间为30～36分钟；流速为每分钟0.5ml；柱温45℃；检测波长为220nm。取人生长激素对照品，加0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，过滤除菌，室温放置24小时，作为系统适用性溶液。取系统适用性溶液20μl，注入液相色谱仪，人生长激素主峰与脱氨的人生长激素峰之间的分离度应不小于1.0，人生长激素主峰的拖尾因子应为0.9～1.8。

　　测定法  取人生长激素原液适量，加0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液制成每1ml中含人生长激素2mg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，总相关蛋白质不得大于6.0%。

　　3.1.3.2  高分子蛋白质

　　按3.1.4项下测定，除去保留时间大于人生长激素主峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于人生长激素主峰的所有峰面积之和不得大于4.0%。

　　3.1.3.3  宿主菌DNA残留量

　　依法测定（通则3407）或采用经验证并批准的其他适宜方法，每1mg人生长激素中含宿主菌DNA残留量不得过1.5ng。

　　3.1.3.4  宿主菌蛋白质残留量

　　依法检查（通则3412、3413或3414）或采用经验证并批准的其他适宜方法，每1mg人生长激素中宿主菌体蛋白质残留量不得过10ng。

　　3.1.3.5  残余抗生素活性

　　如在生产（例如种子液制备）中使用抗生素，应依法检查（通则3408），或按照经验证并批准的方法检查，不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。

　　3.1.3.6  细菌内毒素检查

　　依法检查（通则1143），每1mg人生长激素中含细菌内毒素的量应小于5.0EU。

　　3.1.3.7  生物学活性（每年至少测定一次）

　　依法测定（通则1219），每1mg人生长激素的活性不得少于2.5单位。

　　3.1.4  含量

　　色谱条件与系统适用性试验  依法测定（通则0514），以适合分离分子量为5000～60000Da球状蛋白的亲水改性硅胶为填充剂；以异丙醇-0.063mol/L磷酸盐缓冲液（取无水磷酸氢二钠5.18g、磷酸二氢钠3.65g，加水950ml，用磷酸或氢氧化钠试液调节pH值至7.0，用水制成1000ml）（3∶97）为流动相；流速为每分钟0.6ml；检测波长为214nm。取人生长激素单体与二聚体混合物对照品，加0.025mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.0）［取0.063mol/L磷酸盐缓冲液（1→2.5）］制成每1ml中约含1.0mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，人生长激素单体峰与二聚体峰之间的分离度应符合要求。

　　测定法  取人生长激素原液适量，加0.025mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.0）制成每1ml中约含人生长激素1.0mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取人生长激素对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

　　3.2  半成品检定

　　如需对原液进行稀释或加入其他辅料制成半成品，应确定半成品的质量控制要求，包括检定项目和可接受的标准，除另有规定外，应按3.2.1项和3.2.2项进行。

　　3.2.1  细菌内毒素检查

　　依法检查（通则1143），每1mg人生长激素含细菌内毒素的量应小于5.0EU。

　　3.2.2  无菌检查

　　依法检查（通则1101薄膜过滤法），应符合规定。

　　3.3  成品检定

　　3.3.1  性状

　　本品为白色冻干粉末。

　　3.3.2  鉴别

　　3.3.2.1  反相色谱法 

　　按3.3.3.3项下进行，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

　　3.3.2.2  等电聚焦

　　按3.1.2.4项下进行，供试品溶液主区带位置应与对照品溶液主区带位置一致。

　　3.3.3  检查

　　3.3.3.1  pH值

　　取本品，每瓶按说明书标示量加适量注射用水或附带溶剂溶解，依法测定（通则0631），pH值应为6.5～8.5。

　　3.3.3.2  溶液的澄清度与颜色

　　取本品，用水溶解并稀释制成每1ml中含人生长激素1.6mg的溶液，依法检查（通则0901第一法与0902第一法），溶液应澄清无色；如显浑浊，与2号浊度标准液比较，不得更浓。

　　3.3.3.3  相关蛋白质

　　取本品，照3.1.3.1项下的方法检查，相关蛋白质不得大于12.0%。

　　3.3.3.4  高分子蛋白质

　　取本品，照3.1.3.2项下的方法检查，除去保留时间大于主峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于人生长激素主峰的所有峰面积之和不得大于6.0%。

　　3.3.3.5  水分

　　取本品，照水分测定法（通则0832第一法2库仑滴定法）或经批准的其他方法，含水分不得过3.0%。

　　3.3.3.6  可见异物

　　取本品，每瓶按说明书标示量加适量注射用水或附带溶剂溶解，依法检查（通则0904第一法），不得检岀金属屑、玻璃屑或最大粒径超过2mm纤毛和块状物等明显外来的可见异物。

　　3.3.3.7  异常毒性检查

　　取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含人生长激素1.6mg的溶液，依法检查（通则1141小鼠实验法），按腹腔注射给药，应符合规定。

　　3.3.3.8  无菌检查

　　取本品，依法检查（通则1101薄膜过滤法），应符合规定。

　　3.3.3.9  细菌内毒素检查

　　取本品，依法检查（通则1143），每1mg人生长激素中含细菌内毒素的量应小于5.0EU。

　　3.3.3.10  装量差异

　　依法检查（通则0102），应符合规定。

　　3.3.3.11  不溶性微粒

　　取本品，依法检查（通则0903），每份容器中含10μm及10μm以上的微粒数不得过6000粒；含25μm及25μm以上的微粒数不得过600粒。

　　3.3.4  含量

　　取本品5瓶，分别加0.025mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）适量，使内容物溶解，5瓶全量混合，摇匀并定量稀释制成每1ml中约1.0mg的溶液，作为供试品溶液。按3.1.4项下测定。含人生长激素（C₉₉₀H₁₅₂₈N₂₆₂O₃₀₀S₇）应为标示量的90.0%～110.0%。

如产品有附带溶剂，应符合批准的生产工艺及质量标准要求。

于2～8℃遮光、密闭保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。

应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定和批准的内容。

中华人民共和国药典：2020年版.三部/国家药典委员会编. —北京：中国医药科技出版社，2020.5 ISBN 978-7-5214-1575-9