Kang A Kang B Xuexing Dingxing Shiji （Dankelongkangti）

Anti-A and Anti-B Blood Grouping Reagents （Monoclonal Antibody）

本品系用A血型单克隆抗体或B血型单克隆抗体配制而成，用于鉴定人ABO血型。

生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

　　2.1  专用原材料

　　2.1.1  杂交瘤细胞

　　杂交瘤细胞库的建立及检定应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制”规定。

　　杂交瘤细胞建株，需经几次克隆筛选，以100%克隆孔上清液相应抗体阳性的作为原始细胞株。原始细胞株经传代，稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株为主细胞。

　　工作细胞库经血凝效价测定合格后方能用于生产。

　　2.1.2  染色剂

　　抗A血型试剂可选用亚甲蓝等蓝色染料，抗B血型试剂可选用吖啶黄等黄色染料。

　　2.1.3  抑菌剂

　　可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等。

　　2.1.4  稳定剂

　　可选用蛋白质、葡萄糖、盐类等，不得使用凝聚胺、聚乙二醇等促凝剂用于配制稳定剂。

　　2.2  制备程序

　　2.2.1  杂交瘤细胞培养物上清液的制备

　　抗A血型或抗B血型杂交瘤细胞经培养传代，取培养物上清液，检测血凝效价合格后扩大培养即得。

　　2.2.2  小鼠杂交瘤腹水的制备

　　2.2.2.1  小鼠腹腔预处理

　　健康BALB/c小鼠腹腔用石蜡油预处理。

　　2.2.2.2  接种

　　检测杂交瘤细胞培养物上清液，其抗体血凝效价合格后，用0.85%～0.90%氯化钠溶液或不完全培养液重新悬浮细胞，接种于数天前用石蜡油处理过的小鼠腹腔内。

　　2.2.2.3  腹水的收集

　　接种后数周，处死小鼠，收集腹水，离心去沉淀，以适当方法去除纤维蛋白原，加入适宜的抑菌剂，-30℃及以下保存。

　　2.3  半成品

　　2.3.1  配制

　　合并杂交瘤细胞培养物上清液，可加入少量腹水混合，加入染色剂，使抗A血型定型试剂呈蓝色，抗B血型定型试剂呈黄色，除菌过滤。

　　2.3.2  半成品检定

　　按3.1项进行。

　　2.4  成品

　　2.4.1  分批

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　2.4.2  分装与冻干

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　2.4.3  规格

　　应为经批准的规格。

　　2.4.4  包装

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　3.1  半成品检定

　　3.1.1  效价测定

　　取抗A血型试剂、抗B血型试剂及国家参考品，2倍系列稀释至适宜的稀释度，分别加入相应的2%A1、A2、A2B、B血型红细胞悬液，同时设红细胞悬液对照，置18～25℃反应15分钟，以每分钟1000转离心1分钟后肉眼观察结果。红细胞悬液对照应不产生凝集，抗A血型试剂对A1、A2、A2B血型红细胞的凝集效价和抗B血型试剂对B血型红细胞的凝集效价均不得低于国家参考品的同步测定结果。

　　3.1.2特异性

　　取抗A血型试剂、抗B血型试剂，分别加入2%A1、A2B、B、O血型红细胞悬液，同时设红细胞悬液对照，置18～25℃反应15分钟，以每分钟1000转离心1分钟后肉眼观察结果。红细胞悬液对照应不产生凝集；抗A血型试剂应与A1、A2B血型红细胞产生凝集，与B、O血型红细胞不产生凝集；抗B血型试剂应与B血型红细胞产生凝集，与A1、O血型红细胞不产生凝集，且均不应出现溶血和其他不易分辨的现象。

　　3.1.3冷凝集素和不规则抗体测定

　　取3例A型（测抗B血型试剂用）、3例B型（测抗A血型试剂用）、10例O型红细胞，每一例红细胞分别用0.85%～0.90%氯化钠溶液配制成2%红细胞悬液、用20%牛血清白蛋白生理氯化钠溶液配制成5%红细胞悬液。2%红细胞悬液与相应血型试剂分别于4℃、18～25℃、37℃进行测试；5%红细胞悬液与相应血型试剂分别于18～25℃、37℃进行测试。2小时后肉眼观察结果，所有测试结果均不得产生凝集反应或溶血现象。

　　3.1.4无菌检查

　　半成品分装后留样做无菌检查，釆用直接接种法（通则1101），应符合规定。

　　3.1.5稳定性试验

　　37℃至少放置7天（有效期为1年）或14天（有效期为2年）后，应符合3.1.1～3.1.4项要求。

　　3.2 成品检定

　　3.2.1物理检查

　　外观

　　抗A血型试剂应为透明或微带乳光的蓝色液体，抗B血型试剂应为透明或微带乳光的黄色液体，且均不应有摇不散的沉淀或异物。

　　3.2.2 效价测定

　　按3.1.1项进行。

　　3.2.3 特异性

　　按3.1.2项进行。

　　3.2.4冷凝集素和不规则抗体测定

　　按3.1.3项进行。

　　3.2.5亲和力

　　将抗A、抗B血型试剂分别与10%红细胞悬液于瓷板或玻片上混匀，抗A血型试剂与A1、A2、A2B血型红细胞出现凝集的时间应分别不长于15秒、30秒、45秒；抗B血型试剂与B血型红细胞出现凝集的时间应不长于15秒，且在3分钟内凝集块应达到1mm2以上。

　　2.2.6稳定性试验

　　出厂前进行，37℃至少放置7天（有效期为1年）或14天（有效期为2年）后，应符合3.2.1～3.2.5项要求。

于2～8℃避光保存。自包装之日起，按批准的有效期执行。

应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定和批准的内容。

中华人民共和国药典：2020年版.三部/国家药典委员会编. —北京：中国医药科技出版社，2020.5 ISBN 978-7-5214-1575-9